實(shí)驗(yàn)步驟
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
提前12 h將Matrigel放到4℃融化，將實(shí)驗(yàn)用到的槍頭、EP管等材料提前放到-20℃預(yù)冷；實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備冰盒，整個實(shí)驗(yàn)操作過程置于冰上進(jìn)行；
2. 包被基底膜
在冰上將Matrigel膠用無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，混勻后加入小室中，注意動作輕柔，不要產(chǎn)生氣泡，將小室放入CO2培養(yǎng)箱中孵育2h備用；
3. 水化基底膜
將孵育完成的小室中上室多余的液體小心吸掉，每孔中加入100 μL無血清培養(yǎng)基，在培養(yǎng)箱中放置30 min。
4. 接種細(xì)胞
a. 將狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行消化，離心，用PBS洗1-2遍，用無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至1-10×105/ml（需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定具體的細(xì)胞密度）；
b. 在下室中加入500μL的含10%FBS的培養(yǎng)基，將小室小心放入24孔板內(nèi)，在上室中加入細(xì)胞懸液100 μL-200 μL，放入培養(yǎng)箱中（需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定具體的培養(yǎng)時間）。
5. 固定染色、拍照及計數(shù)
a. 到時間點(diǎn)后將小室取出，用PBS清洗小室，用棉簽輕柔擦去上室細(xì)胞和Matrigel后，用4%多聚甲醛固定或甲chun20 min，將小室適當(dāng)風(fēng)干，用0.1%結(jié)晶紫染色30 min，PBS清洗3遍，于37℃干燥。
b. 將小室置于顯微鏡下，隨機(jī)選取5個視野，拍照并計數(shù)。
三、注意事項(xiàng)
1. Matrigel使用說明
Matrigel應(yīng)避免反復(fù)凍融，分裝時將整瓶Matrigel埋沒在碎冰盒中，再將冰盒置于4℃冰箱中，建議放在冰箱靠后的位置，放置過夜，避免使用冰箱門進(jìn)行解凍，因?yàn)槠鋬?nèi)裝物的溫度在反復(fù)打開時會迅速上升，導(dǎo)致材料過早凝膠化。分裝后置于-20℃保存，長期保存可放于-80℃冰箱中；
2. 如何盡量避免增殖對結(jié)果的影響
如果在侵襲實(shí)驗(yàn)期間發(fā)生了大量的增殖，那么計算出的侵襲數(shù)據(jù)將受到影響。因此，侵襲實(shí)驗(yàn)時間越短，增殖對數(shù)據(jù)的影響就越小。當(dāng)然，實(shí)驗(yàn)中的腫瘤細(xì)胞很可能在48或72小時內(nèi)就會增殖，但如果每個治療組的增殖量是相似的，允許直接比較治療組之間的相對侵襲數(shù)據(jù)；
3. 小室的重復(fù)使用
很多實(shí)驗(yàn)室會將小室進(jìn)行重復(fù)利用，我們需要在用棉簽擦拭時避免用力，避免損傷小室膜，重復(fù)利用前應(yīng)在鏡下觀察小室膜是否有裂縫。

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