3M生物指示劑的數量和放置位置應綜合滅菌器的幾何形狀、空腔尺寸、產品的裝載方式以及熱分布確認的結果等要素確定，且在滅菌設備的冷點處必需放置生物指示劑。裝有生物指示劑的容器應緊鄰于裝有測溫探頭的容器，直接接種供試品宜放置在熱穿透試驗產品的緊鄰位置，滅菌器的其他部位應裝載產品或者類似物，以盡可能的模仿實際生產時的狀況。
生物指示劑的接種量（即初始芽孢數）需要根據生物指示劑在待滅菌樣品中的耐受性和滅菌工藝條件來確定，應符合挑戰性試驗的要求。生物指示劑的接種量可用附件2 的方法計算。
實際驗證過程中可以將生物指示劑接種到待滅菌產品中或直接使用市售的生物指示劑成品。應確保生物指示劑的DT 值和總芽孢數等主要質量參數的準確性。
