線粒體活性氧產生速率（ROS）試劑盒熒光法說明書
熒光法 100管/96樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性：
產品
發貨地：上海
測定意義:
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。
正常情況下，細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態，細胞內活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破，細胞內活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。
因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。
測定原理:
熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。
需自備的儀器和用品：
多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一：液體 120 mL×1 瓶, 4℃保存；
試劑二：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 1.5 mL×1 瓶,-20℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6 mL 試劑二充分溶解；
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6 mL 試劑二充分溶解；
試劑六：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6 mL 試劑二充分溶解；
試劑七：液體×1 瓶, 避光-20℃保存；臨用前用試劑二稀釋 300 倍后使用；
線粒體提?。?/span>
1、準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將上述勻漿液于 600g（離心率），4℃離心 5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
4、棄上清，沉淀中加入 200μL 試劑二重懸
生化檢測試劑盒操作步驟：
一、?準備工具和環境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學實驗的步。杭州
?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?：按照說明書的指導，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。
?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產生泡沫，以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?：混合后，耐心等待試劑盒的反應，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?：時間到后，仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
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注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
