4香豆酸:輔酶A連接酶(4CL)測試盒紫外分光光度法說明書
紫外分光光度法 50管/24樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性:
產品名稱:4香豆酸:輔酶A連接酶(4CL)測試盒紫外分光光度法
貨號:LZ-S01349-A
規格 : 50管/24樣
測試方法:紫外分光光度法
產品分類:信號系列
發貨地:上海
測定意義:
4CL是連接苯途徑與木質素特異合成途徑的關鍵酶,主要催化肉桂酸生成相應的肉桂酸輔酶A酯,是合成木質素與其他苯丙烷類化合物的代謝流向調控點。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量而提高其品質提供依據。
測定原理:
4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA,在333nm下測4-香豆酸CoA生成速率,即可反映4CL活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 60 mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;
NAD+和 NADH 的提取:
1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g組織,加入 1mL 酸性提取液),冰浴研磨,60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
NADH 的提?。喊凑战M織質量(g):堿性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g
組織,加入 1mL 堿性提取液),冰浴研磨,60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):酸性提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):堿性提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
生化檢測試劑盒操作步驟:
一、?準備工具和環境?:確保操作臺面干凈、整潔,這是進行科學實驗的步。
?二、?仔細閱讀說明書?:這是使用試劑盒的基礎,說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?:按照說明書的指導,正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本,如血液、唾液或鼻涕等。
?四、樣本混合?:將樣本與試劑小心混合,注意輕柔操作,避免產生泡沫,以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?:混合后,耐心等待試劑盒的反應,這個時間可以用來進行其他活動,但不要著急,因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?:時間到后,仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示,告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
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注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
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