傳統化學合成法是將天冬氨酸轉變為酸酐，然后與苯丙氨酸甲酯縮合成阿斯巴甜?；瘜W法的區域選擇性較差，產生兩種異構體：α-阿斯巴甜和β-阿斯巴甜，α-阿斯巴甜為主產物，β-阿斯巴甜有苦味，分離除去，工藝比較復雜。 [5]
嗜熱菌蛋白酶（thermolysin）已成功用于有機相中阿斯巴甜前體的合成，它使苯丙氨酸甲酯與氨基保護的天冬氨酸縮合形成阿斯巴甜前體，再經還原、脫保護基，即可得到阿斯巴甜。酶法催化的反應具有對映體選擇性，只合成α-阿斯巴甜，反應中可以采用外消旋體苯丙氨酸甲酯作為底物，酶催化反應時只利用L-苯丙氨酸甲酯，未反應的D-苯丙氨酸甲酯可形成鹽，酸化后可使之外消旋化而循環利用。 [5]
該催化反應具有以下特色：①利用了耐有機溶劑的嗜熱菌蛋白酶；②利用非水相體系，顯著提高了底物濃度；③嗜熱菌蛋白酶對DL-苯丙氨酸甲酯中L-苯丙氨酸甲酯具有嚴格的選擇性，可以利用廉價的外消旋體作為原料；④將嗜熱菌蛋白酶與合成原料置于水相中進行酶促反應，生成的中間體則隨時被萃取到有機相中。因此，酶促反應不受抑制，可連續進行，產率超過95%。 [5]
合成影響因素（乙醇），有研究表明，阿斯巴甜在水中溶解度一般較小，約為1%（25℃），但隨著溶劑中乙醇含量的不斷增加，阿斯巴甜的溶解度也逐漸上升，當阿斯巴甜在乙醇水溶液中溶解度到達峰值時，隨著乙醇繼續加入，阿斯巴甜溶解度會逐漸降低。 [1]

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