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LCN2脂質運載蛋白2ELISA試劑盒

更新時間1:2025-09-09 信息編號:e2cujd2d371b4 舉報維權
LCN2脂質運載蛋白2ELISA試劑盒
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供應商 上海聯祖生物科技有限公司 店鋪
認證
報價 人民幣 1290.00元每盒
關鍵詞 ELISA Kit,ELISA檢測試劑盒,酶聯ELISA試劑盒,ELISA試劑盒
所在地 上海市嘉定區嘉羅公路1661
何君
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2年

產品詳細介紹

聯祖ELISA試劑盒產品介紹

LCN2脂質運載蛋白2ELISA試劑盒


我司位于上海奉賢區我司提供的試劑僅供研究使用       

實驗目的:

本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中LCN2脂質運載蛋白2的含量。

實驗原理:

   試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗(ELISA)。往預先包被LCN2脂質運載蛋白2捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的LCN2脂質運載蛋白2呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

試劑盒組成:

截圖29.png

截圖20.png

操作步驟:

脂質運載蛋白2ELISA方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

5. 終止反應:于各反應孔中加入2M0.05ml。

6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

  LCN2 試劑盒方法二 用于檢測未知抗體的間接法:   

  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

注意事項:

1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2. 在酶聯ELISA試劑盒中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

  (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:用直接ELISA檢測試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。4.jpg

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所屬分類:化學助劑/試劑盒

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