線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)試劑盒紫外分光光度法說明書
紫外分光光度法 50管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性:
產(chǎn)品名稱:線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)試劑盒紫外分光光度法
貨號:LZ-S01144-A
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品分類:三羧酸循環(huán)系列
發(fā)貨地:上海
測定意義:
CDHm(EC 1.1.1.41)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時將NAD+ 還原為NADH,是三羧酸循環(huán)的限速酶之一,其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。
測定原理:
ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH,導致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:50mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1 支,-20℃保存;
試劑四:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1 支,4℃保存;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;
試劑七:粉劑×1 支,-20℃保存; 臨用前加入 3mL 蒸餾水充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
工作液的配制:臨用前把試劑五、試劑六轉移到試劑四中混合溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
樣本的前處理:
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細菌或細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。
3、 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
4、 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的 ICDHm(此步可選做)。
5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),用于線粒體 ICDHm 活性測定。
生化檢測試劑盒操作步驟:
一、?準備工具和環(huán)境?:確保操作臺面干凈、整潔,這是進行科學實驗的步。
?二、?仔細閱讀說明書?:這是使用試劑盒的基礎,說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?:按照說明書的指導,正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本,如血液、唾液或鼻涕等。杭州
?四、樣本混合?:將樣本與試劑小心混合,注意輕柔操作,避免產(chǎn)生泡沫,以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?:混合后,耐心等待試劑盒的反應,這個時間可以用來進行其他活動,但不要著急,因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?:時間到后,仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示,告訴你如何根據(jù)顯示的線條或顏色來判斷結果。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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產(chǎn)品名:脂肪酸合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
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產(chǎn)品名:乙酰輔酶A試劑盒,紫外分光光度法,試劑盒
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產(chǎn)品名:酰基轉移酶,可見分光光度法,試劑盒
可溶性淀粉合成酶(SSS)試劑盒紫外分光光度法
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產(chǎn)品名:可溶性淀粉合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
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產(chǎn)品名:結合態(tài)淀粉合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
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產(chǎn)品名:NO含量,可見分光光度法,試劑盒