共價結合型果膠(CSP)含量試劑盒可見分光光度法說明書
可見分光光度法 50管/24樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性:
產品名稱:共價結合型果膠(CSP)含量試劑盒可見分光光度法
貨號:LZ-S01396-A
規格 : 50管/24樣
測試方法:可見分光光度法
產品分類:光合作用系列
發貨地:上海
測定意義:
果膠是構成細胞初生壁和中膠層的主要成分,主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是許多高等植物細胞壁中含量豐富的多糖成分,其特的物理、化學性質影響著植物源食品的口感和品質。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環偶聯的方式交聯,通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠,如水溶性果膠(WSP)、離子結合型果膠(ISP)和共價結合果膠(CSP)。
測定原理:
利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價結合型果膠(CSP),采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中與咔唑試劑進行縮合反應,生成物質在530 nm處有大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 50mL× 1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 50mL× 1 瓶,4℃保存。
試劑三:標準液 1mL× 1 支,4℃保存。
試劑四:液體 5 mL× 1 瓶,4℃保存
生化檢測試劑盒操作步驟:
一、?準備工具和環境?:確保操作臺面干凈、整潔,這是進行科學實驗的步。
?二、?仔細閱讀說明書?:這是使用試劑盒的基礎,說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?:按照說明書的指導,正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本,如血液、唾液或鼻涕等。
?四、樣本混合?:將樣本與試劑小心混合,注意輕柔操作,避免產生泡沫,以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?:混合后,耐心等待試劑盒的反應,這個時間可以用來進行其他活動,但不要著急,因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?:時間到后,仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示,告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
NAD+和 NADH 的提取:
1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g組織,加入 1mL 酸性提取液),冰浴研磨,60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g
組織,加入 1mL 堿性提取液),冰浴研磨,60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):酸性提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):堿性提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),60℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
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