肉桂醇脫氫酶(CAD)試劑盒紫外分光光度法說明書
紫外分光光度法 50管/48樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
產(chǎn)品名稱:肉桂醇脫氫酶(CAD)試劑盒紫外分光光度法
貨號:LZ-S01348-A
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品分類:信號系列
發(fā)貨地:上海
測定意義:
CAD是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一,是木質(zhì)素單體合成反應(yīng)中的后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應(yīng)的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
測定原理:
CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 60mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;
粗酶液提取:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
操作步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
生化檢測試劑盒常見問題:
在使用生化檢測試劑盒時,可能會遇到一系列常見問題,這些問題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實驗操作等方面。以下是一些常見的問題及其解決方法:
一、?測定原理?:生化試劑盒通過化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)測定樣本中物質(zhì)的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計和酶標(biāo)儀,它們的測定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質(zhì)、動植物組織、血清、細(xì)胞細(xì)菌、食品等樣本均可進(jìn)行測定?。
?二、選擇不同規(guī)格的試劑盒?:根據(jù)實驗的實際情況選擇合適的試劑盒。如果實驗室有酶標(biāo)儀且具備檢測波長,可以選擇微量法試劑盒;如果有分光光度計及相應(yīng)規(guī)格的比色皿,則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購買前仔細(xì)閱讀說明書,確認(rèn)自備的儀器和試劑是否符合要求?。
?三、保存方法?:收到試劑盒后,如果暫時不用,應(yīng)按照外包裝上指示的溫度保存。拆開包裝后,應(yīng)按照每個試劑的保存溫度進(jìn)行保存,注意有些試劑忌反復(fù)凍融,有些粉劑溶解后性質(zhì)不穩(wěn)定?。
四、?有效期?:一般生化試劑盒的有效期為6個月,也有特殊貨號的有效期為1年。具體以實際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)?1。
?五、樣本處理?:新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測定,但有些生理活性物質(zhì)容易降解,建議使用新鮮樣本測定。對于冷凍樣本,建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時間有所不同,例如4℃可保存一周,-20℃保存一個月,-80℃保存3個月?。
?六、土壤酶活性測定?:對于土壤酶活性的測定,建議將鮮土風(fēng)干并過篩后取樣,以測定的重復(fù)性。若使用鮮土測定,需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。
七、?預(yù)測定?:在進(jìn)行正式測定前,建議選擇2-3個預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實驗。通過預(yù)測定可以全面反映樣品特點(diǎn)、試劑質(zhì)量、儀器設(shè)備穩(wěn)定性和操作規(guī)范性,確保正式測定結(jié)果真實可靠?。
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