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牛C-肽(C-P)ELISA試劑盒

更新時間0:2024-12-18 信息編號:4e3048aq34a781 舉報維權
牛C-肽(C-P)ELISA試劑盒
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牛C-肽(C-P)ELISA試劑盒
供應商 上海篤瑪生物科技有限公司 店鋪
認證
報價 人民幣 2400.00元每盒
關鍵詞 可定制,人ELISA試劑盒,酶聯試劑盒,90分鐘一步法
所在地 上海市寶山區河曲路118號6981室
楊燕燕
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產品詳細介紹


牛C-肽(C-P)ELISA試劑盒



ELISA檢劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與次孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。






組成結構:



1、 :操作中避免任何細胞。使用不含熱原和的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。



2、 :EDTA檸檬酸鹽肝素可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。



3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。



4、 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。



5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。



此IBL試劑盒能用于小鼠,EDTA,細胞上清中白介素-6的定量檢測



試劑盒成分



1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T



2 酶標記: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1



3 品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2



4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1



5 標記稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1



6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1



7 終止液: 1N 12mL x 1



8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記和顯色劑)



ELISA試劑盒的用法包括以下步驟:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml,酶標板中每孔加入50μl,室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌:棄包被液(拍干,再用無塵紙吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次(每孔均要加滿),每次3min~5min。3.封閉:每孔加封閉液(1%BSA)250μl,37℃封閉2h。4.洗滌:用1×PBST洗滌液洗板3次,每次3min~5min。5.加樣:加入已經稀釋好的樣品,37℃反應1h。一般樣本加入50-100μl,充分混勻。6.洗滌:用洗滌液洗板3次,每次3min~5min。7.加入酶標試劑:每孔加入100μl酶標溶液,37℃,1h。8.洗滌:用洗滌液洗板3次,每次3min~5min。9.顯色:每孔先加入顯色劑A液50μl,再加入顯色劑B液50μl,37℃避光10-15min。10.終止及測定:加入50μl終止液,終止反應,用酶標儀在450nm波長處測OD值。



酶免ELISA試劑盒是一種常用的學實驗技術,常用于抗原或的定量檢測。這種試劑盒利用酶聯吸附法(ELISA)技術,將已知的抗原或吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。ELISA試劑盒具有高靈敏度、高特、快速、易操作等優點,在醫學、生物學和化學等領域廣泛應用。






牛C-肽(C-P)ELISA試劑盒



 



 



試驗原理



試劑盒是固相夾心法酶聯吸附實驗(ELISA).已知濃度的、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。



自備材料



1. 蒸餾水。



2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。



3. 振蕩器磁力攪拌器等。



安全性



1. 避免直接終止液和底物A、B。一旦到這些,請盡快用水沖洗。



2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。



3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。



4. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的品應丟棄,不可保存。



5. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。



6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。



7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。



8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。



9. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。



10. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光,避免長時間于光下。避免用手,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。



11. 加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。



12. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。






牛C-肽(C-P)ELISA試劑盒





做好對照



正式試驗時,應分別以陽性對照陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特反應,可采用羊、兔或BSA等封閉。



實驗條件的選擇



ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:



(1) 固相載體的選擇:許多可作為固相載體,如聚氯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。



(2) 包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。



(3) 酶標記工作濃度的選擇:用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度)在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。



(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMBABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。






ELISA試劑盒檢測中的注意事項





1、要移液槍的準確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。有人員進行矯正。



2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的后,要更換槍頭。即使是吸取品時。



3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更。



4、實驗時,要使底物避光保存。



5、用槍吸取時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。



6、吸取時,要用量程和需要量接近的槍去吸,誤差。



7、將加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內,可使槍頭上的液滴和孔壁,液滴會自然流下去。



8、全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻。也可以用酶標儀的晃動功能。



9、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。



10、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加。沒有洗板機時,倒去后,要將酶標板在報紙或毛紙上拍干。



11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。



12、底物是光的,要在臨用前現配。



13、檢測前,要打開酶標儀,使之10分鐘以上。



14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免。



15、待檢樣品要澄清,否則會影響結果。



16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。



17、應盡量做雙孔實驗,這樣才能數據的準確性。



18、對結果有疑問的樣品要用其它進行確證。








 

所屬分類:化學助劑/試劑盒

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