PCR檢測試劑盒有效期一般為1年,這是指在適當?shù)膬Υ鏈囟认隆:怂釘U增部分的試劑一般要貯存于-20℃下,產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復(fù)凍融。北京
產(chǎn)品名稱:指環(huán)蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Dactylogyrus spp.
產(chǎn)品貨號:LZ-P3458
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應(yīng)比早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的高點。
【質(zhì)控標準】
1. 指環(huán)蟲屬通用 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性:有明顯的指數(shù)擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2)靈敏度高
探針法熒光定量PCRPCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
PCR檢測步驟:
1、樣品處理
1)按照GB 4789.10-2016(或SN/T 1870-2016),取樣品25g(mL),加入到含有225mL 7.5% NaCl肉湯的無菌容器中均質(zhì),調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2。
2)36±1℃培養(yǎng)18-24h。
注:也可參考其他地方標準進行樣品的前處理。
2、核酸提取
1)取40μL增菌液于裂解液管中,98℃或沸水浴10min。
2)冷卻至室溫,吸取上清備用或者置于-20℃保存。
3、反應(yīng)體系配置
從試劑盒中取出SA預(yù)混液,充分融化,短暫離心,然后將陰性對照、樣品的DNA提取液、陽性對照各取5μL分別加入PCR管中,蓋好管蓋,短暫離心,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4、PCR擴增
PCR管置于PCR儀上,推薦反應(yīng)程序設(shè)定如下:反應(yīng)體系為25μL,在第二步每個循環(huán)60℃時檢測熒光信號,檢測通道選擇FAM。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人副性天皰瘡抗體(PNP)ELISA
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)試劑盒 Mouse β-galactosidase,βGAL ELISA Kit
細胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)PCR檢測試劑盒 , SOCS-1 ELISA Kit
MouseLeukoieneB4,LT-B4PCR檢測試劑盒小鼠白三烯B4(LTB4)PCR檢測試劑盒
ELISAKitIL-10兔子白介素10規(guī)格:48T/96T
DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit鹿樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)PCR檢測試劑盒
Anti-HLA-DR/FITC 熒光素標記HLA-DR抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-STAT3(pThr705)/FITC 熒光素標記抗0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATG18/WIPI1 自噬相關(guān)蛋白18抗體 規(guī)格 0.2ml
Beta-Amyloid(1-16) β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白) 0.5mg
phospho-GIT1(Tyr510) 英文名稱: 0酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/RBITC 羅丹明標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-STAT3(pThr705)/FITC 熒光素標記抗0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
指環(huán)蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒mIgM(Human membrane IgM) ELISA Kit 人表面膜MMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-PSD93 突觸后密度蛋白93抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HCMV 人巨細胞病毒抗體 規(guī)格 0.1ml
HABP(Human Hya]uronate binding protein) ELISA Kit 人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白 96T
PEDF 英文名稱: 色素上皮源性因子抗體 0.1ml
BOULE 英文名稱: 成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體 0.2ml
Anti-PSD93 突觸后密度蛋白93抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠趨化因子(C-X-C基序)配體1(CXCL1)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:大鼠趨化因子,CXCL1抗體,單克隆抗體
人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFa)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:人轉(zhuǎn)化生長因子α,TGFa抗體,單克隆抗體
豬腫瘤壞死因子α(TNFa)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:豬腫瘤壞死因子α,TNFa抗體,單克隆抗體
綿羊腫瘤壞死因子α(TNFa)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:綿羊腫瘤壞死因子,TNFa抗體,單克隆抗體
人趨化素(CHEM)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:人趨化素,CHEM抗體,單克隆抗體
大鼠離子化鈣結(jié)合適配分子1(IBA1)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:大鼠離子化鈣,IBA1抗體,單克隆抗體
豬堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:豬堿性成纖維細胞,FGF2抗體,單克隆抗體
大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)單克隆抗體
3490元
產(chǎn)品名:大鼠腦源性神經(jīng),BDNF抗體,單克隆抗體