經24小時、48小時或4天培養，可確認滅菌效果；
依據中國藥典、日本藥典、美國藥典、歐共體藥典（EN866）和ISO11139滅菌法的規定以及適宜的全部條款制造。
濕熱滅菌工藝的微生物挑戰試驗是指將一定量已知DT 值的耐熱芽孢（生物指示劑）在設定的濕熱滅菌條件下進行滅菌，以驗證設定的滅菌工藝是否確實能使產品達到預定的無菌水平。生物指示劑被殺滅的程度，是評價一個滅菌程序有效性的直觀指標。
濕熱滅菌工藝常用的生物指示劑有以下幾種，嗜熱脂肪地芽孢桿菌，生孢梭菌、枯草芽孢桿菌等。對于采用過度殺滅法的滅菌程序，生物指示劑系統主要是嗜熱脂肪地芽孢桿菌的芽孢，或其他D121 °C 值大于1 分鐘的芽孢。殘存概率法由于其熱輸入量比較低，因此在驗證中使用的生物指示劑的耐受性可以小于嗜熱脂肪地芽孢桿菌。
