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中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒

更新時間:2025-09-11 [舉報]
PCR檢測試劑盒產品簡介

產品介紹:


產品名稱:中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱:Anaplasma centrale

產品貨號:LZ-P3219

規格:50T

分類:PCR檢測試劑盒

儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。

運輸:低溫、避光。

有效期:一年

實驗步驟:


一.樣品制備

1.PCR擴增并檢測。根據不同的引物挑選適合的退火溫度進行PCR擴增。擴增產物用2-2.5%的瓊脂糖膠跑水平電泳檢測,上樣量3-5ul。PCR產物為10ng/nl左右為佳。上海

2.PCR產物與變性buffer混合。在干凈的PCR管底部加入5ul SSCP上樣緩沖液(變性緩沖液,同《分子克隆》中的測序緩沖液),然后在緩沖液中央加入PCR擴增產物。按照經驗,擴增效果在瓊脂糖膠上能看出比較亮的帶的樣品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就適當增加1.5、2或3不等,同時加大上樣緩沖液的量,比如加3ul的PCR產物,緩沖液加到8ul變性效果更好。

3.PCR產物變性。加好的樣品進行離心,使樣品集中在管底。PCR儀上95℃變性10分鐘,立即取出PCR產物連同架子一同置于冰上靜置5min,以免變性的產物復性。

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如何進行 PCR 實驗?


一、中央無漿體(無形體)準備實驗材料(1)DNA模板:包含你想要復制的DNA區域。(2)引物:短的單鏈DNA片段,用于指導DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一種酶,用于合成DNA。(4)四種脫氧核苷酸(dNTPs):DNA的構建塊。(5)緩沖液:提供適宜的反應環境。(6)鎂離子或其它必需的離子:通常作為DNA聚合酶的輔助因子。 二、設定反應混合物將所有材料混合在微量離心管中。混合物的總體積通常在20-50微升之間。

截圖21.png


  1. 3. PCR程序(1)將混合物放入PCR機(熱循環儀)中,并設定程序。PCR程序通常包括以下階段:(2)初次變性:加熱至94-98°C,持續幾分鐘,使DNA雙鏈解開成單鏈。(3)循環步驟(通常進行30-40次循環):(4)變性階段:加熱至94-98°C,持續20-30秒,使DNA雙鏈解開。(5)退火階段:降溫至50-65°C,持續20-40秒,允許引物與模板DNA結合。(6)延伸階段:加熱至72°C,持續1分鐘每1千個堿基,以便DNA聚合酶合成新的DNA鏈。(7)后延伸:在72°C下持續5-10分鐘,確保所有可用的DNA模板都被復制。(8)保持階段:將溫度降至4-15°C,直到用戶準備取出樣品。


PCR實驗的基本步驟:


DNA聚合酶是實驗室中常用的生物學酶之一,在PCR實驗中具有重要的作用。實驗室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。

一、探針法熒光定量PCRTaq聚合酶:

Taq聚合酶是由Thermus aquaticus細菌產生的一種DNA聚合酶,在分子生物學研究中得到廣泛應用。Taq聚合酶具有熱穩定性,可以在高溫條件下保持活性,這是由于其來源于熱液生物,能夠存活和正常活動于高溫環境。這使得Taq聚合酶在聚合酶鏈式反應(PCR)中起到關鍵的作用。Taq聚合酶能夠按照DNA模板合成新的DNA鏈,因此在PCR中用于擴增目標DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,導致其生成的PCR產物末端容易出現額外的腺嘌呤堿基。因此,在某些應用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。

二、Pfu聚合酶:

PCR法Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus細菌產生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的熱穩定性和耐酶性。這使得Pfu聚合酶在高溫PCR反應中表現出色,其高度穩定的酶活性能夠確保PCR反應的可靠性和準確性。此外,Pfu聚合酶還具有3'-5'外切酶活性,可以修復并糾正PCR反應中的腺嘌呤堿基誤配,有效防止誤差累積。因此,Pfu聚合酶適用于需要高度準確的PCR擴增和DNA測序。

三、Tth聚合酶:

Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8細菌產生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有熱活性反轉轉錄酶活性,可以將RNA模板合成相應的DNA鏈。因此,Tth聚合酶在逆轉錄PCR(RT-PCR)中得到廣泛應用,用于將RNA轉錄成DNA,并通過增加熱活性酶來實現PCR擴增。此外,Tth聚合酶還具有一定的外切酶活性,可用于修復和校正PCR產物的末端。

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EELISAKit魚雌激素(E)PCR檢測試劑盒

T(Mouse Testoterone)ELISA Kit 小鼠Multi-class antibodies規格: 48T

Anti-Collagen V /FITC 熒光素標記抗Ⅴ型膠原抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh DGAT1/Diglyceride acyltransferase 二脂酰甘油酰基轉移酶抗體 規格 0.2ml

Goat Anti-human IgA/HRP 辣根過氧化物酶標記羊抗人IgA 0.1ml

Phospho-LRP6 (Ser1490) 英文名稱: 0酸化低密度脂蛋白受體相關蛋白6抗體 0.1ml

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Anti-Collagen V /FITC 熒光素標記抗Ⅴ型膠原抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒Anti-phospho-P53 (Thr81)/FITC 熒光素標記0酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rabbit Anti-dog IgG/Biotin 生物素化兔抗狗IgGMulti-class antibodies規格: 0.3ml

環子孢子蛋白抗體 anti-CSP 1ml

Rabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgM 0.1ml

phospho-FGFR3 (Tyr724) 英文名稱: 0酸化成纖維細胞生長因子受體3抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-YWHAE(Thr232) 0酸化14-3-3E蛋白抗體 規格 0.1ml

Rabbit Anti-dog IgG/Biotin 生物素化兔抗狗IgGMulti-class antibodies規格: 0.3ml



標簽:熒光定量PCR試劑盒中央無漿體(無形體)
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