TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡELISA試劑盒
我司位于上海奉賢區我司提供的試劑僅供研究使用
實驗目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ的含量。
實驗原理：
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗（ELISA）。往預先包被TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
試劑盒組成：
操作步驟：
TNFsR-Ⅱ 試劑盒方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
腫瘤壞死因子試劑盒方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
注意事項：
1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在酶聯ELISA試劑盒中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
(1) 固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
（2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇：用直接ELISA檢測試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
公司正在出售的產品：
CHEK1重組小鼠 CHK1 / CHEK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重組蛋白 Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)
BCL2L12重組人 BCL2L12 / BCL2-like 12 蛋白 (GST 標簽) Protein
IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白 (His 標簽)
CXCL12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標簽)
NCR3重組人 NCR3 / NKp300 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
唾液酸結合Ig樣凝集素2(SIGLEC2)重組蛋白 Recombinant Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 2 (SIGLEC2)
CD300E重組人 CD300E / IREM-2 蛋白 (Fc 標簽) Protein
SERPINA3 Protein Human 重組人 SerpinA3 / AACT 蛋白 (His 標簽)
HA Protein H10N3 重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)
TNFRSF1A重組小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (Fc 標簽) Protein
白介素10(IL10)重組蛋白 Recombinant Interleukin 10 (IL10)
CRIP2重組人 CRIP2 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
PLTP Protein Human 重組人 PLTP 蛋白 (His 標簽)
EPHB1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EphB1 / EPHT2 蛋白 (His 標簽)
LCN2重組人 LCN2 / NGAL 蛋白 (His 標簽) Protein
糖抗原125(CA125)重組蛋白 Recombinant Carbohydrate Antigen 125 (CA125)
IFNL1重組人 IL29 / IFNL1 蛋白 Protein
SMYD3 Protein Human 重組人 SMYD3 / ZMYND1 蛋白 (His & FLAG 標簽)
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)
HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein
PR (Progestogerone receptor 0.5mgPR (Progestogerone receptor) 孕激素受體(抗原)
TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡELISA試劑盒ABL1重組人 ABL1 / JTK7 / p150 蛋白 (GST 標簽) Protein
INS Protein Human 重組人 Insulin / INS 蛋白
DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 蛋白 (Fc 標簽)
