線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）試劑盒微量法說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性：
產品名稱：線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）試劑盒微量法
貨號：LZ-S01148
規格 : 100管/96樣
測試方法:微量法
產品分類：三羧酸循環系列
發貨地：上海
測定意義:
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質和線粒體中。
測定原理:
MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一：100mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：20mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：1.5mL×1 支，-20℃保存；
試劑四、液體 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑五、粉劑×1 瓶，-20℃保存；
樣本測定的準備：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 將勻漿液于 600g，4℃離心 5min。
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
4、 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的 MDH（此步可選做）。
5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次），用于 MDHm 活性測定。
生化檢測試劑盒操作步驟：
一、?準備工具和環境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學實驗的步。
?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?：按照說明書的指導，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。杭州
?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產生泡沫，以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?：混合后，耐心等待試劑盒的反應，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?：時間到后，仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
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